人血液样品QPCR检测报告

1. 项目信息

2.实验步骤

2.1引物设计和合成根据GenBank数据库中的人基因编码序列，使用Primer5.0软件设计特异性正反引物，基因（以GAPDH为内参基因）及引物信息见表1。

2.2检测前处理及检测

按提取要求取适量样本，采用“Trizol法”提取人血液总RNA。Trizol购自于北京索莱宝科技有限公司，货号：15596026 

总RNA纯度检测与浓度检测：NanoDrop 2000微量分光光度计。

2.3RNA反转录

采用试剂盒将RNA反转录，反转录试剂盒购置于上海翊圣生物科技有限公司，产品编号“11141ES60”

2.4 QPCR方法和数据分析

参照上海翊圣生物科技有限公司“荧光染料SYBR GreenMaster Mix”试剂盒进行荧光定量PCR检测相关基因的表达水平，产品编号“11201-11203”。PCR反应体系20μL：SYBR PCR mix 10μL，cDNA 2μL，去离子水6.8μL，上游引物、下游引物、ROX Reference Dye2各0.4μL。PCR反应体系：预变性95℃5 min；循环反应，95℃10 s，60℃，30 s，40个循环，融解曲线：95℃15 s，60℃，60 s，95℃，15s。以GAPDH为内参校正个体间差异，以2-△△Ct为依据进行统计分析，使用GraphPadPrism8分析不同组织间的表达差异

3.部分实验结果展示 

mRNA相对表达量及差异数据分析图